Résumé selectionné

Les mécanismes impliqués dans le développement des complications hépatiques liées aux surcharges en fer restent mal connus. A côté des phénomènes de toxicité directe en rapport avec la production d'espèces réactives de l'oxygène, une expression anormale de certains gènes hépatiques pourrait être impliquée.

Le but de ce travail est d'identifier des gènes anormalement exprimés dans le foie surchargé en fer et qui pourraient participer au développement de ces complications.

L'expression des gènes hépatiques a été analysée en réalisant, sur des membranes de macroarrays (Clontech™) qui permettent d'étudier en parallèle l'expression de 1 200 gènes, une hybridation avec des cibles radioactives synthétisées à partir d'ARNm extraits de foies de souris contrôles ou surchargées soit par du fer carbonyl (8 mois de traitement) soit par du fer dextran (1 semaine et 2 mois). L'hyperexpression des gènes d'intérêt a alors été confirmée par PCR quantitative en temps réel utilisant le SYBR Green et/ou western-blot.

L'analyse bioinformatique des macroarrays a révélé que l'expression de l'ARNm de la cycline D1 était augmentée de 3 à 7 fois dans les trois conditions de surcharge en fer étudiées. L'hyperexpression de l'ARNm cycline D1 a été confirmée par PCR quantitative en temps réel. Cette élévation du niveau d'expression de l'ARNm de la cycline D1 était associée à une augmentation de la quantité de protéine Cycline D1, évaluée par western-blot. La cycline D1 étant impliquée dans la transition G1/S du cycle cellulaire, nous avons alors analysé l'expression des ARNm des Cyclines A2 et B1 qui sont exprimées durant les phases S et G2/M du cycle cellulaire. L'expression des ARNm des cyclines A et B1, pour lesquelles des ADNc étaient spottés sur les membranes de macroarrays, n'était détectable dans aucune des conditions étudiées. Par contre, utilisant la PCR quantitative en temps réel, nous avons retrouvé une augmentation, d'un facteur 2, du niveau d'expression des ARNm des cyclines A2 et B1 dans le foie de souris surchargées en fer dextran pendant 1 semaine. De plus, l'expression de l'ARNm de la cycline B1 était augmentée dans les mêmes proportions dans les foie des souris surchargées par le fer carbonyl.

Nos résultats mettent en évidence une augmentation de l'expression de la cycline D1 dans le foie des souris surchargées en fer carbonyl ou en fer dextran De plus les niveaux hépatiques des ARNm des cyclines A2 et B1 sont légèrement augmentés. Une telle régulation des gènes du cycle cellulaire au cours des surcharges en fer pourrait participer au développement de l'hépatomégalie et à la survenue d'un carcinome hépatocellulaire.