Résumé selectionné

	mardi 6 avril 2004
	Symposium

Ciblage du cancer pancréatique par transfert de gène : intérêt du promoteur de la télomèrase et des IRES cellulaires

S Candel⁽²⁾ , A Souque⁽²⁾ , L Créancier⁽¹⁾ , AC Prats⁽¹⁾ , L Buscail⁽²⁾ , P Cordelier⁽²⁾

⁽¹⁾ Unité INSERM U589, FR31, CHU Rangueil, Toulouse
⁽²⁾ Unité INSERM U531, IFR31, CHU Rangueil, Toulouse

Mots clés :
70 Pancréas Exocrine
60 Biologie Moléculaire, Génétique
63 Traitement, Pronostic

Introduction

Le cancer du pancréas représente la 5^ième cause de décès par cancer dans les pays occidentaux. Son pronostic clinique est très mauvais en raison d'une prévention impossible, de l'absence de marqueurs spécifiques, et de son agressivité histologique. La chirurgie d'exérèse, la radiothérapie et la chimiothérapie n'ont que peu d'effet sur la survie des patients. La thérapie génique se présente donc comme une voie de recherche thérapeutique innovante pour ce cancer. Il est cependant essentiel de limiter l'expression des gènes transférés aux cellules tumorales, afin de limiter les effets secondaires non désirés. Cette étude décrit le développement d'outils moléculaires pour le ciblage des cellules cancéreuses pancréatiques humaines.

Matériels et Méthodes

La transcriptase inverse de la télomérase humaine (TERT) est surexprimée dans 85 % des tissus et matériels de cytoponction issus d'adénocarcinomes pancréatiques humains. Le promoteur de TERT et de son amorce à ARN (TR) ont été amplifiés par PCR à partir d'ADN génomique, puis clonés en amont du gène codant pour la luciférase firefly (Luc-F). Plusieurs sites d'entrée interne des ribosomes (IRES) cellulaires ou viraux ont été clonés par PCR. L'activité traductionnelle des IRES contrôle l'expression de Luc-F, alors que l'activité dépendante de la coiffe régule l'expression de Luc renilla (Luc-R). Pour tester ces constructions, les cellules cancéreuses pancréatiques humaines (Capan-1) et de hamster (PC1-0) sont transfectées par le Polyethylénimine 22 kDa (PEI). Les résultats sont exprimés en rapport d'activité luciférase sur activité galactosidase, le contrôle de transfection pour ces études.

Résultats

Des études de transfection transitoire de cellules Capan-1 ou PC1-0 à l'aide de gènes rapporteurs nous ont permit de démontrer une forte activité des promoteurs TERT et TR dans les cellules cancéreuses pancréatiques. Cette activité est entre 2 à 10 fois supérieure à celle des promoteurs viraux constitutifs classiques (hTR >>>>> TERT humaine > TERT de hamster > CMV > SV40). Dans un second temps, nous avons étudié l'activité de différents IRES d'origine virale ou cellulaire dans les cellules pancréatiques humaines. Nous avons mesuré une meilleure activité traductionnelle des IRES du facteur de croissance des fibroblastes (FGF) après transfection transitoire des cellules Capan-1. Cependant, cette activité est inférieure à celle dépendante de la coiffe.

Conclusion

Le développement de promoteurs spécifiques des cellules cancéreuses pancréatiques humaines et d'IRES actifs dans ces cellules devraient permettre 1/ de limiter l'expression de gènes thérapeutiques dans les cellules tumorales et d'ainsi limiter les effets secondaires néfastes, 2/ d'assurer un haut niveau d'expression des transgènes délivrés, et donc de renforcer l'efficacité thérapeutique, et 3/ d'élaborer des stratégies de transfert multigénique par l'utilisation d'IRES, permettant le développement de thérapies combinatoires.