Résumé selectionné

	mardi 6 avril 2004
	Communication Orale

Rôle du récepteur Frizzled-7 dans la pathogenèse du carcinome hépatocellulaire chez l'homme

P Merle⁽³⁾ , S de La Monte⁽⁴⁾ , M Herrmann⁽⁴⁾ , S Tanaka⁽¹⁾ , MC Kew⁽²⁾ , M Kim⁽⁴⁾ , C Trépo⁽³⁾ , JR Wands⁽⁴⁾

⁽¹⁾ Kyushu University, Kyushu, Kukuoka, Japan
⁽²⁾ Witwatersrand University, Medical School, Johannesburg, South Africa
⁽³⁾ INSERM U271, Laboratoire des Hépatites et Pathologies Associées, Lyon
⁽⁴⁾ Liver Research Center, Brown Medical School, Providence RI, USA

Mots clés :
71 Foie, Voies Biliaires
61 Prolifération, Carcinogenèse
89 Membranes, Récepteurs, Signalisation, Transport

Introduction

L'activation de la voie Wnt/b-caténine est fréquente et décisive dans le développement du carcinome hépatocellulaire (CHC). Le mécanisme reste souvent inconnu (mutation de la b-caténine dans 20%, axine dans 7% ou APC exceptionnelle). Le récepteur Frizzled-7 (FZD7) a été identifié récemment. Après liaison avec son ligand Wnt, il peut stabiliser la b-caténine sauvage. Le but de cette étude était de mesurer l'expression de FZD7 au cours de l'oncogenèse hépatique humaine, d'apprécier son influence sur l'activation de la b-caténine et l'acquisition du phénotype tumoral hépatocytaire.

Matériels et Méthodes

L'expression de FZD7 a été mesurée par RT-PCR quantitative en temps réel dans des lignées d'hépatome (Huh7, PLC/PRF/5, Focus, Hep3B, HepaRG et HepG2) et des CHC humains viro-induits provenant d'Afrique du Sud et d'Asie. Le statut de la b-caténine a été évalué par séquençage de l'exon-3 et Western blot après fractionnement subcellulaire. La prolifération cellulaire a été mesurée par Western blot avec un anticorps anti-PCNA, et la motilité cellulaire par migration en chambre de Boyden. Le signal Wnt/FZD7 a été bloqué par transduction lentivirale (pLenti6/V5, Invitrogen) des cellules d'hépatome par des récepteurs FZD7 mutants dominants négatifs (FZD7-DC et FZD7-DCDT).

Résultats

FZD7 était surexprimé dans les 6 lignées d'hépatome (seuil = moyenne foies normaux + 3 DS, a = 0,01), 97 % des CHC (n = 30) et 77 % des foies péritumoraux appariés (n = 30) dépourvus de lésions tumorales microscopiques. En comparant chaque paire tumeur/péritumeur, FZD7 était surexprimé dans 90 % des CHC (p < 0,0001). Nous avons exploré les CHC exprimant FZD7 à haut niveau (> 100 fois moyenne foies normaux) : la b-caténine était sauvage dans 80 % des cas, stabilisée et accumulée dans le noyau et le cytosol de la tumeur et la péritumeur. In vitro, la b-caténine était sauvage (Huh7, Focus et Hep3B) ou mutée (HepG2) comme publié antérieurement. Le ratio noyau/cytosol de la b-caténine sauvage était très élevé dans les lignées exprimant FZD7 à haut niveau (Huh7 et Focus). Le niveau d'expression de FZD7 était corrélé à la motilité cellulaire (p = 0,02). L'inhibition du signal Wnt/FZD7 par expression ectopique de FZD7-DC ou FZD7-DCDT inhibait l'accumulation de b-caténine dans Huh7, Focus et Hep3B. FZD7-DC réduisait très significativement la motilité des cellules Huh7 (p < 0,05).

Conclusion

Ces résultats préliminaires montrent pour la première fois que FZD7 est communément et précocement surexprimé au cours de l'oncogenèse hépatique, et est un candidat potentiel pour l'activation de la voie Wnt/b-caténine en l'absence de mutation de la b-caténine. Dans les hépatocytes cancéreux, FZD7 peut être impliqué dans le contrôle de la motilité. Cet événement est une des anomalies génétiques identifiées les plus précoces au cours de l'oncogenèse hépatique, désignant FZD7 comme une cible thérapeutique privilégiée.