Résumé selectionné

	mardi 6 avril 2004
	Communication Orale

Identification d'une cible des anticorps anti-nucléaires par analyse protéomique dans les hépatites auto-immunes de type 1

E Ballot⁽³⁾ , S Huguet⁽³⁾ , V Labas⁽¹⁾ , JC Duclos-Vallée⁽²⁾ , J Vinh⁽¹⁾ , D Samuel⁽²⁾ , C Johanet⁽³⁾

⁽¹⁾ Laboratoire de Neurobiologie et Diversité Cellulaire CNRS UMR 7637, ESPCI, Paris
⁽²⁾ Centre Hépatobiliaire EPI 9941 UPRES 1595, Hôpital P. Brousse, Villejuif
⁽³⁾ Service d'Immunologie, Hôpital Saint Antoine AP-HP, Paris

Mots clés :
42 Hépatites Chroniques Non Virales
88 Noyau, Expression Des Gènes, Transfert Des Gènes

Introduction

Les anticorps antinucléaires (AAN) appartiennent aux critères définis par le Groupe International des hépatites auto-immunes (HAI) qui permettent de considérer le diagnostic de la maladie comme certain ou probable. Cependant, leurs cibles antigéniques sont encore mal connues dans cette pathologie. Dans cette étude nous avons identifié une des cibles des AAN dans les HAI-1 en utilisant une approche protéomique combinant électrophorèse bi-dimensionnelle et spectrométrie de masse.

Résultats

Nous avons sélectionné 29 sérums de patients atteints d'HAI-1, AAN positifs par immunofluorescence indirecte sur cellules HEp-2 et foie de rat, et 29 contrôles négatifs. L'ensemble de ces sérums a été analysé par immunoblot avec comme antigène une fraction nucléaire de foie de rat obtenue par centrifugation sur gradient de sucrose. Parmi les bandes marquées, nous nous sommes tout particulièrement intéressés à une protéine de 36 kDa reconnue par 52 % des sérums d'HAI-1 versus 14 % des contrôles (p < 0,002). Sur immunoblots à partir d'électrophorèse bi-dimensionnels, cette bande de 36 kDa correspond à 5 spots de pI 8,0 à pI 9,0. Après digestion trypsique de ces spots, l'analyse des cartes peptidiques massiques obtenues par spectrométrie de masse MALDI-TOF (Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization-Time of Flight) et la recherche d'homologies de séquences après séquençage partiel des peptides de digestion par LC-ESI-MS/MS (nanoscale liquid chromatography electrospray tandem mass spectrometry) permettent l'identification sans ambiguïté d'une ribonucléoprotéine hnRNP(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein) A2/B1.

Conclusion

Des auto-anticorps dirigés contre le complexe protéique hnRNP (A1, A2, B1, B2, C1, C2) ont déjà été rapportés dans des pathologies rhumatologiques, mais c'est la première description des hnRNP A2/B1 comme cible des AAN dans les HAI-1. Cette étude montre aussi un exemple concret de l'utilisation de l'électrophorèse bidimensionnelle associée à la spectrométrie de masse dans l'identification de nouvelles cibles antigéniques dans les pathologies auto-immunes hépatiques.