Résumé selectionné

	mardi 6 avril 2004
	Poster

Transfert de gène dans les cellules d'hépatocarcinome par des vecteurs lentiviraux : évaluation de l'expression du transgène obtenue par différents promoteurs ubiquitaires et spécifiques de tumeurs

P Borentain⁽²⁾ , R Uch⁽²⁾ , S Mathieu⁽²⁾ , S Chapel⁽¹⁾ , C Bagnis⁽¹⁾ , P Mannoni⁽¹⁾ , R Gerolami⁽²⁾

⁽¹⁾ EFS Alpes Méditerranée, Bd Baille, Marseille
⁽²⁾ INSERM U 559-EFS, Faculté Timone, Marseille

Mots clés :
88 Noyau, Expression Des Gènes, Transfert Des Gènes
71 Foie, Voies Biliaires
60 Biologie Moléculaire, Génétique

Introduction

Quel que soit le gène thérapeutique envisagé, l'intensité de son expression dans les cellules tumorales est un élément important dans la thérapie génique des cancers. L'objectif de ce travail est d'évaluer l'expression du transgène obtenue dans des cellules d'hépatocarcinomes (HCC) avec des vecteurs lentiviraux en utilisant différents promoteurs et séquences régulatrices de la transcription.

Matériels et Méthodes

Nous avons construit des vecteurs lentiviraux contenant le gène marqueur codant pour la GFP (green fluorescent protein) placé sous le contrôle de différents promoteurs ubiquitaires (CMV, PGK, CAG) ou spécifiques de tumeur (promoteur alphafoetoproteine de rat ou humain, AFPr ou AFPh). Nous avons également étudié l'impact des séquences WPRE (woodchuck post regulatory element) et DNAflap sur l'expression de la GFP. Ces vecteurs ont été évalués sur des cellules Huh7 et HepG2. Les analyses de fluorescence ont été réalisées par FACS. La spécificité des promoteurs AFP

Résultats

Des 5 promoteurs évalués, le promoteur CAG permet l'expression la plus forte de GFP dans les cellules d'HCC devant le promoteur AFPh. La séquence WPRE permet une augmentation très significative (de 3 à 10 fois) de l'expression de la GFP avec les 3 promoteurs ubiquitaires. Elle n'a pas d'effet, voire elle diminue, l'expression de la GFP avec les promoteurs AFP. La séquence DNAflap associée aux promoteurs PGK et AFPh améliore significativement la transduction des cellules de CHC avec une intensité de fluorescence multipliée par 3 par rapport aux vecteurs comparables sans DNAflap. Les séquences WPRE et DNAflap ne modifient pas la spécificité d'expression du promoteur AFPh attestée par l'absence de fluorescence dans des hépatocytes humains.

Conclusion

Le promoteur AFPh placé dans un vecteur lentiviral contenant également la séquence DNAflap permet une expression forte du transgène (plus forte que les promoteurs CMV et PGK) qui reste spécifique de tumeur. Ce vecteur devrait permettre d'obtenir un effet antitumoral avec une toxicité limitée.