Résumé selectionné

	mardi 6 avril 2004
	Poster

Profil d'expression des récepteurs Frizzled au cours de l'oncogenèse hépatique dans différentes lignées de souris transgéniques

P Merle⁽²⁾ , M Herrmann⁽³⁾ , S de La Monte⁽³⁾ , L Lefrançois⁽²⁾ , S Califano⁽³⁾ , C Trépo⁽²⁾ , S Tanaka⁽¹⁾ , L Vitvitski⁽²⁾ , JR Wands⁽³⁾

⁽¹⁾ Kyushu, Kyushu University, Fukuoka, Japan
⁽²⁾ INSERM U271, Laboratoire des Hépatites et Pathologies Associées, Lyon
⁽³⁾ Liver Research Center, Brown Medical School, Providence RI, USA

Mots clés :
60 Biologie Moléculaire, Génétique
71 Foie, Voies Biliaires
89 Membranes, Récepteurs, Signalisation, Transport

Introduction

L'activation de la voie Wnt/b-caténine est un événement fréquent et décisif dans le développement du carcinome hépatocellulaire (CHC). Des travaux préliminaires nous ont récemment permis de montrer qu'elle peut être liée à la surexpression du récepteur Frizzled-7 en l'absence de mutation de la b-caténine, et qu'il s'agit d'un événement précoce et fréquent dans le CHC humain. Le but de notre étude a été d'étudier le profil d'expression des 9 récepteurs Frizzled murins (Fzd-1 à Fzd-9) au cours de l'oncogenèse hépatique dans des souris transgéniques (Tg).

Matériels et Méthodes

Les lignées Tg SV40 (n = 19), X/c-myc (n = 15), IRS-1/c-myc (n = 18) et c-myc (n = 7) expriment de façon isolée ou combinée, une protéine transformante (grand antigène T de SV40), l'oncogène c-myc, une protéine virale (HBX) associée à l'activation transcriptionnelle de gènes impliqués dans la croissance cellulaire, et un stimulus constitutif de prolifération hépatocytaire IRS-1 induisant l'activation de la voie insuline/IGF-1. Ces souris développent de la dysplasie hépatocytaire, puis des CHC (SV40 = 3-5 mois ; X/c-myc = 7-9 mois ; IRS-1/c-myc et c-myc=9-12 mois). L'expression hépatique des gènes Frizzled a été mesurée par RT-PCR quantitative en temps réel pour Fzd-1 à Fzd-9, puis par Western blot avec un anticorps commercial et un anticorps spécifique que nous avons développé pour Fzd-7. Les mutations de l'exon-2 de la b-caténine ont été recherchées par séquençage, et l'accumulation et l'état de phosphorylation de la protéine ont été mesurés par Western blot.

Résultats

Aucun signal n'a été détecté pour Fzd-2, 3, 5 ou 9. Fzd-7 était le seul récepteur surexprimé dès la dysplasie (19/36, 53 %), puis dans les CHC (14/20, 70 %) (seuil = moyenne contrôles non-Tg ± 3DS, a = 0,01). La précocité d'expression de Fzd-7 dans les dysplasies était corrélée à une latence plus courte d'apparition des CHC. Par opposition, Fzd-8 était réprimé graduellement dans la dysplasie (5/22, 23 %), puis dans les CHC (10/17, 60 %). Nous avons confirmé la surexpression de Fzd-7 par Western blot avec 2 anticorps polyclonaux ciblant 2 portions distinctes du domaine extracellulaire du récepteur. Nous avons montré que les CHC et la dysplasie péri tumorale développés dans la lignée X/c-myc ne comportaient pas de mutation de la b-caténine. Par contre, la surexpression de Fzd-7 dans les CHC était associée à une accumulation de b-caténine sauvage et déphosphorylée.

Conclusion

La surexpression de Fzd-7 (ARNm et protéine) est un événement précoce (dès la dysplasie) et commun dans les différents modèles transgéniques murins d'oncogenèse hépatique. Cela peut être associé à l'accumulation de b-caténine sauvage et active (déphosphorylée) dans les tumeurs. Comme nous avons retrouvé des résultats similaires chez l'homme, la surexpression de Fzd-7 pourrait être un des événements moléculaires les plus communs et précoces identifiés à ce jour au cours de l'oncogenèse hépatique.