Rationnel

Les approches globales (transcriptome, protéome) visant à identifier et comprendre l'ensemble des anomalies générées par un état pathologique dans un organe ou un type cellulaire n'ont été que récemment appliquées au contexte de la cirrhose et du carcinome hépatocellulaire (CHC). Des travaux réalisés précédemment au sein du laboratoire ont permis de montrer que parmi les gènes réprimés au cours de l'apparition d'un CHC, il a été mis en exergue les variations du nombre de copies de l'ARNm du gène Tumor Suppressor Activated Pathway-6 (TSAP6) ou dudulin-2, qui est un gène suppresseur de tumeur sous contrôle du facteur transcriptionnel p53. La Duduline-2 est une protéine transmembranaire proapoptotique. L'expression de son ARNm est significativement réprimée dans le CHC comparé au foie cirrhotique et au foie sain.
Le but de ce travail était d'une part de montrer, par des techniques d'immunohistochimie, si la diminution d'expression du gène était corrélée à une diminution de la protéine correspondante et d'autre part de mettre au point un modèle animal développant un CHC selon une transition fibrose-cirrhose-tumeur superposable à celle observée chez l'homme afin d'analyser dans ce modèle les variations du nombre de transcrits de la duduline.
 

 Matériels et Méthodes

Des prélèvements hépatiques humains disponibles au laboratoire d'anatomopathologie du CHU de Rouen ont été sélectionnés, en fonction de l'état pathologique du foie, afin de réaliser des immunomarquages au moyen d'un anticorps polyclonal anti-Duduline humaine produit chez le lapin.
Le modèle animal utilisé a été celui d'une carcinogenèse chimique chez des rats Wistars développant un CHC après injection hebdomadaire de diéthylnitrosamine (DEN). Les prélèvements hépatiques, à des temps définis, de rats contrôles et malades, ont permis la réalisation d'extraction d'ARN et l'analyse par RT-PCR pour étudier l'expression quantitative des transcrits de 5 gènes : la duduline et les couples ligands-recepteurs HGF/c-met et TGFalpha/EGFR. Parallèlement, tout prélèvement hépatique faisant l'objet d'une étude par RT-PCR était analysé en anatomopathologie, afin de corréler les résultats à l'état pathologique sous-jacent.
 

 Résultats

Nos travaux ont permis de montrer une corrélation stricte chez l'homme entre les résultats de l'analyse par RT-PCR du gène de la duduline et les immunomarquages de la protéine correspondante en fonction de l'évolution de la maladie.
Dans le modèle animal utilisé, les mêmes variations quantitatives que chez l'homme ont été mises en évidence, avec une augmentation des transcrits du gène de la duduline au stade de cirrhose et un effondrement au stade de CHC.
 

 Conclusion

Ces résultats nous incitent à poursuivre des travaux sur des modèles expérimentaux de souris transgéniques surexprimant le gène de la duduline au moyen d'un promoteur foie spécifique, afin d'évaluer l'impact de la surexpression du gène sur l'évolution du CHC.