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La famille génétique des lipases pancréatiques est subdivisée en trois sous familles, qui présentent une forte identité de séquence (65-68 %), et des propriétés biochimiques différentes. La lipase classique a été bien caractérisée à la fois au niveau fonctionnel et structural. Les formes de lipases apparentées (HPLRP1 et HPLRP2) sont principalement retrouvées dans le pancréas fœtal. Seule la HPLRP1, dont aucune activité enzymatique n'a été détectée jusqu'à présent a été retrouvée dans la sécrétion pancréatique exocrine. La HPLRP2 présente une activité de type phospholipasique A1, galactolipasique, et lipasique.

Le but de ce travail a été la mise au point d'un test ELISA double sandwich, spécifique de la forme classique de la HPL, et de quantifier les niveaux de lipase dans les sérums de patients présentant une hyperlipasémie. Enfin, nous avons testé la spécificité du test enzymatique Kodak (EKTACHEM), utilisé en routine dans les services hospitaliers, par rapport aux tests potentiométriques et ELISA.

Un ELISA de type sandwich a été mis au point avec un anticorps polyclonal purifié anti HPL classique, reconnaissant les trois formes de lipases pancréatiques, et un anticorps monoclonal de souris (146-40), spécifique de la forme classique. 51 sérums de patients hospitalisés, ont été inclus et répartis en deux groupes : un groupe contrôle (13), de patients sans affection pancréatique ayant une lipasémie normale (28-300 UI/L selon Kodak), et un groupe de patients (38) souffrant de pathologies pancréatiques (pancréatites aiguës, chroniques, idiopathiques, cancer). L'activité lipasique des sérums a été déterminée par le test Kodak Ektachem, et par dosage titrimétrique (pH Stat). Différents échantillons de lipases humaines (HPL, HPLRP1, HPLRP2, lipase gastrique, lipoprotéine lipase), et microbiennes (Pseudomonas cepacia, Rhizomucor miehei, Fusarium solari pisi), ont été testées par la méthode Kodak Ektachem.

Le test ELISA a été validé par des tests de variations intra et inter essais (coefficient de variation inf. à 6 et 5 % respectivement). Le pourcentage de recouvrement de lipase exogène est de 92,7 à 99 %. La limite inférieure de détection est de 0,03 ng/mL (vs 1,3 ng/mL pour le test Kodak). La corrélation des concentrations obtenues à partir des tests ELISA et Kodak est excellente (98 %), quelle que soit la valeur, haute ou basse de la lipasémie. Par contre, la spécificité du test Kodak est moins bonne, puisqu'il détecte une activité lipasique élevée pour la HPLRP2, et les lipases microbiennes (HPLRP2 : 5 193 UI/mg, Pseudomonas : 2 347 UI/mg, Fusarium : 815 UI/mg, Rhizomucorm miehei : 22 000 UI/mg).

En conclusion, ce test ELISA spécifique de la forme classique de la HPL a démontré une bonne correspondance avec l'activité lipasique mesurée par la méthode enzymatique Kodak Ektachem. Cependant des interférences enzymatiques restent possibles avec la HPLRP2 et les enzymes microbiennes. Des tests Elisa spécifiques des HPLRP1 et HPLRP2 devront être développés pour quantifier les lipases apparentées dans le sérum.