Résumé selectionné

Des travaux récents démontrent qu'il existe dans la moelle hématopoïétique adulte une population de cellules dites « souches » pouvant se différencier en hépatocytes in vivo. Ainsi, la moelle osseuse pourrait être un nouvel outil pour la thérapie cellulaire hépatique. Cependant, ce phénomène de « transdifférenciation » semble trop rare pour envisager une application thérapeutique. Pour surmonter cet obstacle, nous proposons une stratégie de sélection et d'amplification sélective de ces cellules. Nous avons développé des animaux transgéniques exprimant constitutionnellement le gène Bcl-2 humain sous le contrôle d'un promoteur foie spécifique (souris L-PK Bcl-2). L'expression du gène Bcl-2 dans le foie protège ces animaux d'une apoptose induite par un agoniste de la voie Fas/CD95, l'anticorps Jo2. Lorsque ces hépatocytes sont transplantés dans le foie de souris normales et qu'une pression de sélection est appliquée par des injections répétées de l'anticorps Jo2 à dose subléthale, les hépatocytes prolifèrent pour progressivement repeupler le foie des receveurs. Nous montrons maintenant que cette approche de sélection directe in vivo permet d'expandre un faible nombre d'hépatocytes dérivés de cellules médullaires.

Des souris C57Bl/6 porteuses de l'antigène leucocytaire Ly5.1 sont greffées avec de la moelle issue de donneurs mâles Ly5.2. Les groupes expérimentaux sont : animaux greffés avec de la moelle issue des animaux L-PK-Bcl-2 (Groupe Bcl-2) et animaux greffés avec une moelle normale (Groupe WT). Le chimérisme des animaux est estimé sur sang périphérique par les marqueurs leucocytaires Ly5. Après reconstitution médullaire, les animaux sont soumis à une injection hebdomadaire de l'anticorps Jo2 ; un groupe contrôle d'animaux Bcl-2 ne reçoit pas l'anticorps Jo2. Les animaux sont sacrifiés après 4, 8, et 12 injections de l'agoniste de la voie Fas. Les hépatocytes dérivés de la moelle hématopoïétique sont détectés par (i) RT-PCR sur le transcrit Bcl-2 ; (ii) immunohistochimie sur la protéine Bcl-2 et (iii) hybridation in situ sur le chromosome Y avec co-marquage pour des marqueurs de cellules épithéliales : les cytokératines 8,18,19.

Aucun signal n'est détecté dans le groupe Bcl-2 sans lésion hépatique. A l'opposé, des transcrits sont détectés chez 67 % des animaux transplantés avec de la moelle Bcl-2 à 4 cures et chez 100 % à partir de 8 cures. L'examen histologique du foie montre un parenchyme d'architecture normale et des groupements de cellules exprimant de novo la protéine Bcl-2. L'hybridation in situ sur le chromosome Y avec double marquage pour les cytokératine-8,18,19 confirme que ces foyers d'hépatocytes sont dérivés de la moelle.

En conclusion, nos résultats confirment que la moelle osseuse peut être une source d'hépatocytes. De plus, notre méthode de détection nous permet d'affirmer que ces cellules sont bien des hépatocytes matures. Néanmoins, cet événement de « transdifférenciation » semble très rare justifiant une stratégie d'expansion in vivo par avantage sélectif pour espérer atteindre un niveau thérapeutique.