Résumé selectionné

La transplantation d'hépatocytes est une alternative à la transplantation orthotopique pour le traitement des maladies métaboliques du foie, mais elle est pour l'instant peu efficace. Il est donc indispensable de développer des modèles précliniques de transplantation d'hépatocytes. Cependant, le manque de donneurs de foies humains, impose de trouver de nouvelles sources de cellules pour la mise au point de protocoles de transplantation, telles les cellules souches hépatiques. Nous avons caractérisé à long terme un clone de cellules progénitrices hépatiques simiennes fœtales (IPFLS) (1), immortalisées par l'antigène Grand T de SV40 flanqué de sites LoxP.

Le processus d'immortalisation des IPFLS est associé à la ré-expression de l'activité télomérase, qui cependant décroît aux passages tardifs (120 doublements de population) après plus d'un an de culture. Cette diminution est concomitante au raccourcissement des télomères et à une instabilité chromosomique. Cependant, le chromosome porteur du gène p53 est resté intact et les cellules progénitrices immortalisées à long terme ont conservé l'inhibition de contact et leurs propriétés prolifératives. L'analyse des protéines impliquées dans le cycle cellulaire montre une expression stable de p53, Rétinoblastome, p21, Ag-T et c-myc (2). Elles ont aussi gardé un phénotype de cellules progénitrices bipotentes normales. Elles synthétisent du glycogène, de l'urée, expriment des marqueurs hépatiques comme la cytokératine 8/18, l'alpha 1-antitrypsine, la glutamine synthase, et des marqueurs biliaires comme la cytokératine 7. Nous avons transduit la lignée par un vecteur rétroviral exprimant la recombinase Cre-ER^T2, produit de fusion entre la recombinase Cre et le domaine de liaison au ligand du récepteur humain aux oestrogènes, inductible spécifiquement par le 4-hydroxy-tamoxifène (4OHT). L'activation de Cre-ER^T2 par le 4OHT a induit l'excision de l'antigène T, ce qui a conduit à l'arrêt de croissance puis à la mort par apoptose des cellules exprimant la recombinase Cre-ER^T2, montré par le marquage TUNEL et la mise évidence de l'activation de la Caspase 3.

Ces cellules fournissent un nouveau modèle d'étude pour la différentiation hépatique et la carcinogenèse.