Résumé selectionné

Introduction

Des travaux récents ont montré que la glutamine régule le métabolisme protéique et la réponse inflammatoire au niveau de l’intestin. Or la régulation de la réponse inflammatoire semble être étroitement liée à la régulation de la protéolyse. En effet, l’activation du facteur de transcription NF-kB est régulée par la dégradation de son inhibiteur, IkBa, par la voie ATP-ubiquitine dépendante associée au protéasome. Le but de ce travail a donc été d’étudier l’influence d’un prétraitement par la glutamine sur la production d’IL-8, l’ubiquitinylation et l’expression d’IkBadans des cellules épithéliales intestinales.

Matériels et Méthodes

Des cellules épithéliales intestinales de la lignée HCT-8 ont été incubées en présence de 0,6 ou 2 ou 10 mM de glutamine pendant 24h. Les cellules ont ensuite été stimulées ou non par des cytokines proinflammatoires (IL-1b, TNFa et IFNg) . Pour l’étude de IkBa, 20 µM de MG132, un inhibiteur spécifique du protéasome, ont été ajoutés au milieu de culture. Le dosage de l’IL-8 a été réalisé par test ELISA. L’expression d’IkBalibre ou ubiquitinylé a été visualisée, après immunoprécipitation, par western blot. Les résultats, exprimés avec la moyenne ± ESM (n = 4) , ont été comparés par test ANOVA, p<0.05 étant considéré comme le seuil de significativité.

Résultats

A l’état basal, un prétraitement avec des doses croissantes de glutamine diminue la production d’IL-8 (1585 ± 878 vs 3226 ± 915 pg/mg protéines, p<0,05) et augmente l’expression d’IkBa (190 ± 32 vs 100 ± 24, p<0,05) . L’expression de l’ubiquitine libre et l’activité du protéasome ne sont pas significativement affectées par la glutamine. L’ajout de cytokines augmente la production d’IL-8 (78390 ± 28111 vs 3326 ± 915 pg/mg protéines, p<0.05) , l’expression du complexe IkBa-ubiquitine (120 ± 3 vs 100 ± 4, p<0.05) et diminue l’expression d’IkBa (40 ± 2 vs 100 ± 24, p<0,05) . Dans ces conditions stimulées, la glutamine diminue la production d’IL-8 (54165 ± 27055 vs 78938 ± 28111 pg/mg protéines, p<0,05) et l’expression du complexe IkBa-ubiquitine (87 ± 6 vs 120 ± 3, p<0,05) alors que l’expression d’IkBalibre est augmentée (58 ± 5 vs 40 ± 1, p<0,05) .

Conclusion

Nos résultats confirment qu’un pré-traitement par la glutamine joue un rôle protecteur au niveau intestinal en diminuant la production d’IL-8. Dans notre modèle, des cellules épithéliales intestinales humaines HCT-8, cet effet inhibiteur de la glutamine sur la production d’IL-8 implique une diminution du processus d’ubiquitinylation d’IkBa.