Introduction

Une augmentation de l'activité sérine-protéase fécale a récemment été mise en évidence chez des patients atteints de recto-colite hémorragique (RCH). Les sérines-protéases ont la capacité d'activer une famille de quatre récepteurs appelée PAR (Protease-Activated Receptor). Ces récepteurs pourraient jouer un rôle dans la réponse immunitaire muqueuse et être impliqués dans la régulation de la fonction de barrière muqueuse. Le récepteur PAR4 a été décrit au niveau du côlon de rat mais aucune étude ne s'est intéressée à son rôle à ce niveau. Le but de notre étude était de rechercher l'expression de ce récepteur chez le sujet sain et atteint de RCH, et d'étudier l'effet de son activation sur la fonction de barrière de la muqueuse colique chez la souris.
 

 Matériels et Méthodes

Des surnageants ont été préparés à partir de selles obtenues chez des patients sains, et des patients présentant une RCH active. Leur activité protéasique a été déterminée par spectrophotométrie (clivage de l'azocaséine), en présence ou en absence d'AEBSF (inhibiteur des sérine-protéases). Parallèlement, ces surnageants (500 µL) ont été mis en contact avec la muqueuse de segments de côlon distal de souris, montés en chambre de Ussing, et leur effet sur la perméabilité paracellulaire colique (flux de dextran) a été mesurée en présence et en absence d'un antagoniste sélectif des récepteurs PAR4 (N-palmitoyl-SGRRYGHALR-NH2). L'effet du peptide activateur du récepteur PAR4 (AY-NH2) a été évalué dans les mêmes conditions. Des biopsies ont été prélevées chez des patients sains et des patients souffrant de RCH (zones saine et inflammatoire), et l'expression du récepteur PAR4 a été recherchée par immunohistochimie.
 

 Résultats

Les surnageants RCH présentaient une activité protéasique significativement plus importante que les témoins (2193 ± 430 U/mg de protéine vs 698 ± 128, p < 0,01). Celle-ci était totalement inhibée par l'AEBSF, montrant que cette augmentation était liée aux serine-protéases luminales. La mise en contact de ces surnageants avec la muqueuse colique de souris entraînait une augmentation significative du flux de dextran à travers l'épithélium, par comparaison avec des surnageants issus de sujets sains (3,34 ± 0,49 nmol/h/cm² vs 2,00 ± 0,28 ; p < 0,05). L'antagoniste PAR4 inhibait totalement l'effet des surnageants RCH sur la perméabilité paracellulaire au dextran (1,84 ± 0,2 nmol/h/cm² ; p < 0,05). A l'inverse, l'agoniste PAR4 (50 µM) augmentait le flux de dextran à travers l'épithélium colique de souris (2,68 ± 0,38 nmol/h/cm² vs 1,13 ± 0,17 avec le solvant, p < 0,01). Par immunohistochimie, nous avons observé une absence d'expression du récepteur PAR4 au niveau muqueux sur des biopsies témoins, et sur celles prélevées en zone saine de RCH. En revanche, le récepteur était fortement exprimé par les entérocytes sur des biopsies prélevées en zone inflammatoire de RCH.
 

 Conclusion

Le récepteur PAR4 est uniquement exprimé au niveau épithélial en zone inflammatoire. Son activation spécifique par des protéases luminales induit une altération de la fonction de barrière de l'épithélium colique. Ces résultats confèrent un rôle inédit à ce récepteur dans la physiopathologie de la RCH.