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CO.12 - Défaut de la voie Wnt/beta-caténine dans le foie de patient avec une hépatite alcoolique sévère : vers de nouvelles stratégies thérapeutiques

M. Bousaleh, F. Maggiotto, M. Ningarhari, F. Artru, V. Gnemmi, E. Gantier, S. Truant, E. Boleslawski, S. Dharancy, G. Lassailly, P. Mathurin, A. Louvet, L. Dubuquoy

Introduction

L'hépatite alcoolique (HA) est la forme la plus grave de la maladie alcoolique du foie. La physiopathologie de cette maladie, décrite comme inflammatoire, est mal connue. Des études récentes suggèrent un dysfonctionnement profond des processus de régénération hépatique impliquant des cellules bipotentes appelées progéniteurs hépatiques (HPC). Dans l’HA sévère, ces HPC sont incapables de donner des hépatocytes fonctionnels et se différencient préférentiellement en cholangiocytes sans que les mécanismes à l’origine de cette différenciation biaisée ne soient compris. Chez la souris, deux voies antagonistes, Wnt/β-caténine et Notch, orientent la différenciation des HPC. L'objectif de cette étude était d'identifier les principaux mécanismes cellulaires régulant la différenciation des HPC au cours de l’HA.

Patients et Methodes

Des échantillons de foie provenant d’explants de patients transplantés pour HA sévère résistante au traitement médical (n=27) étaient comparés à des foies de cirrhose alcoolique (n=20) ou à des échantillons de foie sain de patients « contrôles » opérés pour résection de métastases (n=24). L’expression, la localisation et l’activation des acteurs potentiels de la différenciation des HPC étaient évalués par des techniques de qPCR, western blot et immunohistochimie (IHC). La lignée cellulaire HepaRG, modèle humain de HPC était traitée par des modulateurs des voies Wnt/β-caténine et Notch. La différenciation de ces cellules était évaluée phénotypiquement et quantifiée grâce à des marqueurs hépatocytaires et biliaires.

Résultats

L’expression du ligand Wnt3 et le corécepteur LRP6, des acteurs importants de la voie Wnt/β-caténine, étaient significativement diminués dans le foie de patients HA par rapport aux foies contrôles (p=0.006 et p<0.0001 respectivement). Des marquages IHC révélaient une localisation essentiellement membranaire et cytoplasmique de la β-caténine indiquant une faible activité de la voie dans les foies d’HA. L’expression génique d’acteurs majeurs de la voie Notch était significativement augmentée dans les foies de patients HA, notamment les récepteurs Notch1 (p=0,007), Notch2 (p=0,01), Notch3 (p<0,0001) et le ligand JAG1 (p=0,001), par rapport aux foies contrôles. L’IHC révélait un marquage unique de Notch1 dans le foie de patients HA au niveau de la membrane des hépatocytes et HPC. Ce marquage n’était pas retrouvé dans le foie contrôle et la cirrhose. L’anticorps anti-Notch2 montrait une nette induction de l’expression de cette protéine dans de nombreuses cellules du parenchyme hépatique d’HA avec une localisation nucléaire dans certaines cellules marquant l’activation de la voie.

Le traitement des HepaRG avec le ligand Wnt3a pendant 30 jours induisait une différenciation majoritairement hépatocytaire. Ce traitement induisait une augmentation significative des marqueurs hépatocytaires TAT (1,74 vs 1,15 pour les cellules non traitées), Aldolase b (1102,9 vs 500,66), CYP3A4 (24,18 vs 15,35) et C/EBPα (0,825 vs 0,3) et une diminution des marqueurs cholangiocytaires CK19 (193,3 vs 272,68 pour les cellules non traitées) et Sox9 (5,09 vs 8,51).

Discussion

Conclusion

La voie Wnt/β-caténine, favorisant la différenciation hépatocytaire des HPC, semble inactive dans le foie de patients HA. Les acteurs de la voie Notch, favorisant la différenciation cholangiocytaire, sont surexprimés dans le parenchyme hépatique d’HA. L’activation de la voie Wnt β-caténine par le Wnt3a induit la différenciation des HPC humains en hépatocytes. La modulation de cette voie pourrait permettre de rétablir une régénération hépatique fonctionnelle au cours de l’HA et représente donc une nouvelle piste thérapeutique dans cette pathologie.

Remerciements

Merci à l’AFEF et le NIAAA pour leur soutien financier.